本发明公开了一种检测脂多糖用荧光传感器、其制备方法和应用,该传感器由第一试剂和第二试剂组成,所述的第一试剂是覆盖有脂多糖适配体LPSA链和脂多糖适配体碱基互补配对的识别链DNA的磁珠水溶液;所述的第二试剂是由覆盖有长链和短链的磁珠形成的DNA Walker体系。通过荧光分光光谱技术分析walker产物,实现了脂多糖的分析检测。本发明方法简单、稳定、特异性强、灵敏度高,可以在10‑4 ng/mL~107 ng/mL范围内线性检测脂多糖,且可以有效地区分脂多糖与其他对照物质。